糖化结果有疑问,答案尽在血片寻

文摘   2024-09-26 22:30   江西  


【前言】


目前糖化血红蛋白(HbA1c)测定的方法有多种,如:离子交换层析、常规电泳法、等电聚焦电泳、亲和层析、免疫测定、比色法、分光光度法、质谱。


在离子交换层析法中,有阳离子交换树脂微柱法、低压液相层析(LPLC)、高效液相层析(HPLC)。


离子交换HPLC法是测定HbA1c的金标准,但是工作中也发现有些异常的糖化血红蛋白结果,究其根本,均是异常血红蛋白所致。


而我们知道,异常血红蛋白比较常见的就是地中海贫血,对于这个疾病,血片中可以发现一些端倪。


【案例经过】


9月20日,生化同事发现某门诊患者,男,47岁,临床诊断:慢性结肠炎,其糖化血红蛋白结果的曲线有异常。


单纯看数值,仪器给出的结果是,HbA1c 7.9%,属于一个偏高的水平,参考范围是4.0%~6.0%。


如果只从LIS界面去审核报告,那很很可能会审核出去,毕竟我们用的是高效液相色谱法,结果准确性杠杠的。


当然细心的老师,会对比一下当日空腹血糖结果,该患者当日空腹血糖 4.54mmol/L。


糖化血红蛋白反映的是2~3个月的平均血糖水平,莫非患者是一个既往糖尿病患者?


还是近期坚持服用了降糖药,导致检测当日血糖正常?


我们来看看它的测定曲线。



红色:患者的血红蛋白峰值

黄色:不稳定的血红蛋白峰

紫色:仪器给出的HbA1c结果

从图谱中不难发现,不稳定的血红蛋白峰竟然高于患者的峰?

看到这里有老师要说了,啊……太难了……这是什么啊?

看不懂,不会看!

不急,先来看下自己手绘的图形峰,或许可以解答你的疑惑。


从图2中可以得出,色谱法做出来的糖化血红蛋白,有6个峰,分别为:A1a、A1b、HbF、LA1c、SA1c、A0。

我们通常测定患者的峰,取的是SA1c(也即是HbA1c),是以色谱图中HbA1c的峰面积占全血红蛋白峰面积的百分比表示。

另外从手绘图中可以发现LA1c(不稳定血红蛋白峰)是要低于SA1c(测定峰)。

所以熟悉生化的老师一看可以发现,患者的糖化血红蛋白结果受到了干扰,也即是测到了异常的血红蛋白。

手绘图不一定准确,自己从网上找到一个比较好看的糖化血红蛋白峰图谱,如下。


结合我们是赣南地区,地中海贫血和缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血比较多见。

而与异常血红蛋白有关的,那只有地中海贫血了。

于是,我们将患者的糖化血红蛋白标本(EDTA—K2管)加做一个血常规,结果提示 WBC 9.76×10⁹/L,RBC 5.27×10¹²/L,HGB 108g/L,MCV 73.4fL,PLT 478×10⁹/L。


其中引人注目的是有核红细胞比例竟然有2.0%。

正常的成年人,可是不能有的啊。而新生儿外周血偶尔见到,还算是正常现象。

放大WNR(WBC + NRBC ,白细胞+有核红细胞的意思)散点图。


红色:有核红细胞散点

绿色:白细胞散点

黄色:嗜碱性粒细胞散点

白色:影细胞/细胞碎片

根据地中海贫血公式,Mentzer指数=平均红细胞体积/红细胞数,>12.5缺铁性贫血可能性大,<12.5地中海贫血可能性大。

(有时12.5会四舍五入,≈13,所以工作中遇到老师说小于13,也能理解。)

我们算下,73.4/5.27=13.9,额……这个结果有点打脸了。

但是,不管怎么样,公式只是初筛。不一定完全准确。

具体还是要结合血片形态与地中海基因筛查。

推片镜检。


红色:靶形红细胞

黑色:晚幼红细胞(有核红细胞)

有老师不理解有核红细胞是什么意思。

解释下,正常的红细胞是没有胞核的,而如果有胞核了,那就说明它是原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞这一类啦。

而它们在外周血形态中,我们会统称为有核红细胞。

有核红细胞的胞核一般是核圆居中,胞浆没有颗粒(胞浆有颗粒一定不是红系,记住)。

只看这个视野,就基本可断定,患者是地中海贫血。糖化血红蛋白结果正是受此干扰。


红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

绿色:血小板

此图目的在于区别血小板和豪焦小体,因为很多人会把误入红细胞内的血小板当做是豪焦小体。

豪焦小体是朱砂痣,圆圆的、小小的一颗,附着在红细胞胞膜上。

而血小板有颗粒感,它的圆是不太规则的圆,周围有时可见毛絮状的胞质。

通常,血小板也是比豪焦小体更大一些的。

红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

紫色:球形红细胞

可见豪焦小体、球形红细胞,说明有溶血或血红蛋白病,也符合地中海贫血特征。


红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体,个头有点大

绿色:晚幼红细胞

黄色:淋巴细胞


红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

绿色:嗜碱性粒细胞,胞浆有个空泡

此图目的在于,浙江省杭州市中医院赵梦鹤老师擅长看体液细胞形态,不太擅长看血细胞形态,有点不太认识嗜碱性粒细胞,尤其是紫黑色颗粒减少的嗜碱性粒细胞。

前几天的形态比赛就有一道嗜碱性粒细胞。

我们辨认嗜碱性粒细胞,只需要记住红心火龙果即可,果肉红通通的,就像嗜碱性粒的胞浆颜色,火龙果的籽就像嗜碱性粒细胞的紫黑色颗粒一样。

进修时候,黄老师教的,细胞形态难记,记美食总能记住吧。

(叫我学习,我可能没动力学;叫我品鉴美食,这题我会😄)

嗜碱性粒细胞胞浆可以颗粒很少,也可以伴随胞浆有很多空泡,这种形态就更不典型了,2021年赣州市形态比赛考过,抢答题,还好抢到了也答对了。


红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

绿色:嗜碱性粒细胞,黑色颗粒也是比较少


红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

绿色:嗜碱性粒细胞,仔细看,胞核上有两个黑色颗粒


红色:靶形红细胞

黑色:豪焦小体

此图目的在于,豪焦小体也有个头更大一些的,只不过很少见罢了。



【案例分析】


1、后续患者并未做地中海基因筛查检查。但通过血片形态,我可以锁定地中海贫血方向,且是地贫携带可能性。


缺铁性贫血一般不会有靶形红细胞与豪焦小体。


巨幼细胞性贫血一般MCV会增大,大于110fL,或者可见多分叶核的中性粒细胞。也有例外的,MCV 正常的巨幼细胞性贫血,少见就是。


2、既然本案例的色谱法糖化血红蛋白结果不可信,我们还有免疫胶体金法的糖化血红蛋白。


试剂如下。



一测试,患者糖化血红蛋白结果为4.1%,跟当日空腹血糖结果接近。


最后我们报告的是糖化血红蛋白4.1%。


所以,任何一种检测方法学并不是100%完美的。


之前我们都是诟病胶体金法的试剂,敏感性、准确性差,但真正遇到一些疑难的标本时候,胶体金法还是有其自身的优势。


这里额外举个例子,做胃液的隐血,镜下可见影红细胞,但胶体金法的试剂就是阴性,即便稀释几倍还是阴性,拿尿液试纸条测就是阳性,再用化学法检测(甲苯胺蓝,免疫室的底物AB液)也是阳性。


3、怎么理解本案例的糖化血红蛋白受干扰呢。


正常的血红蛋白是由4条珠蛋白肽链合成,这4条肽链分别是2条α链和2条β链组成。


高效液相色谱法测糖化血红蛋白,检测正常人群时候,由于珠蛋白链都是正常的,没有缺失,没有异常错位,结果自然可靠。


但是遇到地中海贫血患者,其α链或β链合成是异常的,仪器有时候会把这些异常血红蛋白结果计算到测试标本中,自然测出来的糖化血红蛋白结果会被假性升高。此时需要查看糖化血红蛋白图谱才能发现。


当然也有可能,地中海贫血患者也有测不出来糖化血红蛋白结果的,工作中我们也遇到过。


另外还有一个异常的,就是糖化血红蛋白结果结果很低很低的,考虑溶血性贫血所致,红细胞寿命很短,基本全部被破坏了,仪器就测不到那些链,因为我们仪器是吸取全血标本测试,需要经过多道程序洗脱才呈现图谱峰值。


好了,以上就是今天的内容~


把自己所知道所见到之事写出来分享,既是加深印象,也是帮助大家,遇到难题可自己处理。

检验笔记
一名主管技师,五家公众号原创作者,记录检验科工作中点滴案例,共同学习与进步。
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