菌种传代次数必须在5代以内?

学术   2024-11-03 06:20   陕西  
实验室有个小朋友问我,“菌种传代次数必须在5代以内?我已经传了八九代了,我认菌种还挺好,平板上长得特别旺盛。”那么问题来了,菌种传代次数必须在5代以内?为什么有这种说法?依据是什么?带着问题一起学习一下。
1.“5代”是经验值还是理论值?

据我了解,是经验。是基于微生物学研究中的经验,一代代的实验积累得出的结论,目的就是减少由于长期传代导致的菌种退化或变异,确保研究和生产中使用的菌种具有稳定的遗传特性和生物活性。这篇文章介绍了相关内容,可以阅读一下。

Reference Strains How many passages are too many.pdf 

2.菌种传代次数必须在5代以内?5代以上行不行?

众所周知,传代次数越多变异率越高,并没人说5代以上的菌种就不能使用,而是,越容易出现问题。如果5代以上菌种形态结构、生理生化性状等均未发生变化,还是可以使用的。但,在实验过程中,并不建议过多传代。(难听话,明知不可为而为之,自讨苦吃。)

3.依据在哪里?
中国药典:2020年版•四部-9203药品微生物实验室质量管理指导原则,可以去官网查看。
https://ydz.chp.org.cn/#/item?bookId=4&entryId=5709
工作菌株的传代次数应严格控制,不得超过5代(从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代),以防止过度的传代增加菌种变异的风险。

1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养,任何形式的转种均被认为是传代1次。必要时,实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。

4.哪里有参照方法?

之前发表过一篇,可以参照微生物菌种传代技术知识图谱相关内容,收集了大量的文献资料,最后总结的文章,需要的友友可以阅读。

5.菌种如何保藏?

在药典中9203药品微生物实验室质量管理指导原则中的规定如下:建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻(低于-30℃)等方法保存。低于-70℃或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时间。标准储备菌株可用于制备每月或每周1次转种的工作菌株。冷冻菌种一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻和再次使用。也可参照微生物菌种保藏与活化技术指南:收藏必备手册相关内容。

5.实际操作中,如何确认是哪一代菌种?

部分实验室对菌种管理严格,而一部分实验估计乱成一锅粥了。实验的学生或职工一拨又一拨,菌种之间来回穿梭,早就不知道那代菌种,如何鉴定菌种代数?

这种情况本身就经常存在,那我们只能以接受到菌种的那一代作为0代。接到菌种后,简单地进行形态学鉴定和生理生化特性检测菌株活力。如果没有问题的话,这就是F0,母代菌种。但有一点一定清楚,它确实不是药典中规定的0代菌种。(不标准,只供参考。)

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