在组织病理学中，免疫组化是广泛使用的诊断和检测方法，过去几十年里，这种基于抗体的技术被认为是癌症诊断的金标准工具，为各种肿瘤的免疫治疗提供有价值的信息。然而免疫组化存在①主观因素造成的不同判别差异，②定量的不精确性和检测靶标数量有限等不足。这些局限性导致对复杂的肿瘤微环境中无法进行更深层次的研究。
在这种背景下，多重荧光免疫组化 (multiplex immunohistochemistry, mIHC) 技术应运而生，在肿瘤免疫领域得到越来越多关注。2022年12月，张宁团队和张泽民团队合作在Nature杂志发表题目为Liver tumour immune microenvironment subtypes and neutrophil heterogeneity的研究论文。文章运用单细胞测序技术描绘了原发肝癌的免疫微环境景观并进行了分型，重点关注其中的肿瘤相关中性粒细胞（TAN）。
干湿结合，作者通过mIHC验证，直观地证明了单细胞分析的结果和TAN发挥免疫抑制功能的机制。图g证明 Neu_11_CCL4 这群细胞的真实存在；图q则证明TANs与CD8+ T 细胞在肿瘤微环境中会直接接触，从而发挥免疫抑制的功能（CD66b为中性粒细胞的marker）。
我们曾经提出，单细胞测序数据挖掘主要是三大模式：①绘制图谱，鉴定新的细胞类群；②鉴定Frequency有差异的细胞类群；③鉴定新的细胞通讯。张泽民院士团队这篇论文是第一种模式，而且这种模式基本上是贯穿在其多篇顶刊论文中的。
Fig1. 肿瘤微环境细胞图谱绘制。
Fig2.基于细胞图谱的肿瘤微环境分型。
Fig3.鉴定新的细胞类群，提出肿瘤微环境中性粒细胞异质性的概念，并验证。
Fig4.实验验证，中性粒细胞作为治疗靶点！
其中，空间转录组+多重免疫组化的结合，更是将这项研究推向神坛。即使回过头去看，依然是经典！
参考资料：大佬是怎么验证单细胞结果的？
