PCR实验是一个坑，埋了好多的医僧……
😰三天一小败，五天一大败
真想知道：凭啥我数据出不来???
原因全在这
模板
1️⃣长期放置,反复冻融：模板断裂或者降解,建议使用新鲜制备的DNA模板,并进行琼脂糖凝胶电泳检测
2️⃣模板GC含量过高：DNA双链无法打开,建议更换可用于扩增高GC含量模板的酶及相应的Buffer。
3️⃣模板中含有杂质或者抑制物，特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织中常含有甲酸,导致DNA脱嘌呤。建议降低模板浓度。
4️⃣如果模板是cDNA,需确认逆转录所用的RNA的纯度,完整度。
引物
1️⃣引物设计不合理：引物特异性不好,无法结合到模板上或者结合到模板其他位置
2️⃣引物降解：储存条件不当而导致降解
1️⃣引物特异性差：引物与模板发生非特异性或者引物之间形成二聚体。建议重新设计引物
2️⃣模板不纯、降解或者过量：模板中污染了其他质粒;模板的完整性和纯度不够。
3️⃣反应程序：如果出现比目的条带大的杂带,可以缩短延伸时间,如果非特异性条带较小,可以提高退火温度。
4️⃣酶量过多：建议减少酶用量。
1️⃣胶：制胶时凝胶没有完全融化
2️⃣模板及引物发生降解
3️⃣酶：酶用量过多
这下原因算是搞清楚了，但没熟练的技术和完备的实验器材，2年也还是出不了结果不如赶紧找专业团队→3个月出实验结果，25年毕业/晋升都稳了~
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△实验团队带头人资历
